Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏诱发到用到1型号乳癌流行病学腹泻的实质性亲率在孩童以前就有不错的描述，多个肾脏诱发感染性的孩童当则有70%在血清转换后10月内患上乳癌，而随访15年的孩童这一%提高到84%。来得之下，占流行病学1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的发病机制还无法得到应有的研究成果。

愈加多的人开始运用于应于系统来定义1型号乳癌的实质性：性状在用到多种肾脏诱发时踏入第1之前，用到血糖异常时踏入第2之前，用到腹泻时踏入第3之前。一些多发肾脏诱发感染性的性状，在1期和2期，实质性较快，并转变为发病的1型号乳癌。我们之前描述了各别成员在首次扫描到多种肾脏诱发样品后至再加10年无乳癌的极快实质性者，这组成员病症人数再加，但形态较为确切。随后，我们发现肾脏自身上皮细胞基因表达CD8+T该线粒体反应会在实质性极快的病症当中基本上不不存在，但在更是进一步发病和长年不存在的乳癌病症当中很容易扫描到。这确实暗示，与实质性病症来得，这些病症诱发反应会的恒定减慢。

早期研究成果暗示，尽管恒定性T该线粒体(Treg)数量正常，但乳癌病症不存在一些机制缺陷，其当中除此以外对IL-2的反应会意志力减低。此外，乳癌病症当中的畸变CD4+T该线粒体确实对恒定凸显抵抗性，展现为畸变T该线粒体的消除减弱，自然产生的Treg和粘液产生的游离Treg，以及上皮细胞亲身经历的CD4+T该线粒体当中IL-2反应会减弱。本研究成果的目标是描述了CD4+恒定性T该线粒体(Treg)在群集极极快实质性者当中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以许多人相结合的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病症亲属当中检查1型号乳癌的危险因素。我们之前描述了长年极快实质性者的形态，他们维持多重肾脏诱发感染性超过10年，但无法用到乳癌的流行病学腹泻，快性或非开展性诱发。随后，10名继续维持无乳癌并乐意提供大量血液样品的极快实质性者归属于T和B该线粒体机制研究。在现今的研究成果当中，8名快实质性者(SP组成员)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏诱发感染性。所有的举例来说都受制于1型号乳癌实质性的1期，尽管一些人随后失去了肾脏诱发对某些上皮细胞的感染性反应会，然而，一名病症早已受制于2期至再加6年，但无法用到流行病学腹泻，一名病症被诊断为乳癌，该受试者72岁，在挖掘出实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究当中对该NADPH开展了单独评量。分离外周血单个核该线粒体(PBMCs)，采用多参数流式该线粒体妖术和T该线粒体消除试制评量NADPH当中Treg的频带、表观号和机制。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)开展无统筹聚类研究，评量Treg表观号。

结果：与卫生NADPH来得，来自快实质性体的遗忘CD4+T该线粒体的统筹聚类看出，作用于的遗忘CD4+ Treg频带提高，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)理解提高有关。一名HbA1c升高的病症与实质性极快者和匹配的印证组成员来得，Treg曲谱有所多种不同。机制研究暗示，与卫生NADPH来得，来自极快实质性体的Treg细胞内的CD4+畸变T该线粒体消除轻微受损。展现为对畸变CD4+T该线粒体CD25和CD134理解的消除提高。

左图1 深入的表观号研究看出，CD4+Treg甲型号在快实质性队列当中提高。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NADPH的已逝CD4+CD45RA -该线粒体上。根据标有物理解断定出10个元簇:遗忘T该线粒体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T该线粒体;HLA-DR + GITR +遗忘T该线粒体;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个多种不同Treg标有填充的10个元簇的MST。每个数据流代表一个战略性(100个战略性)，更是大的元战略性(10个元战略性)在数据流组成员远处成品。每个数据流当中的碗左图坚称单个标有的理解级别。(b)每个元聚类的热左图，以看出整体标有理解。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)填充左图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说核素为每个metacluster箱子等分(核素> 0.05%)确切为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T该线粒体(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T该线粒体(l)。浅粉红色红色代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对坚称法秩验证。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的估测号属实，Treg频带的提高是实质性极快的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘研究(g-k)较为SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T该线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展分离，演示FlowSOM社会阶层。(b) HD(小点)和SP(布氏)组成员以及NADPHSP 606(浅粉红色)当中CD25+ cd127的频带汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外闭包的箱子等分;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，标记凸显的簇被辨别为SP和HD队列之间的多种不同。(j)箱子等分看出了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说核素(%)。(k)直方左图看出每个簇的表观号(粉红色)和Treg标有相对来说理解与历史背景理解(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。历史背景与所有其他簇当中标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对坚称法秩验证

左图3 与卫生献血者来得，实质性极快者遗忘treg的GITR提高。每个遗忘CD4+T该线粒体元簇(遗忘T该线粒体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T该线粒体;HLA-DR + GITR +遗忘T该线粒体;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热左图(sp606不除此以外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)的FlowSOM GITR理解串联，看出直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对坚称法秩和验证，p< 0.07(浅粉红色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和匹配的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)串联，看出直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对坚称法秩验证

左图4 来自极快实质性的CD4+ treg该线粒体控制畸变CD4+T该线粒体的意志力减低。SP组成员用粉红色的该线和红色坚称，HD组成员用银色的该线和红色坚称，浅粉红色的该线/红色坚称NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按仔细观察的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导该线粒体，培养出来3紧接著开展流式该线粒体妖术扫描。(a-d)与CD4+接收者者相对来说应的treg培养出来(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。运用于感染性印证(作用于的响应该线粒体不含treg)计算消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

左图5 畸变CD4+T该线粒体对极快实质性的T该线粒体诱导的消除更是敏感。SP组成员用粉红色的该线和红色坚称，HD组成员用银色的该线和红色坚称，浅粉红色的该线/红色坚称NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按仔细观察的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导该线粒体，培养出来3紧接著开展流式该线粒体妖术(CD25反染)和该线粒体因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论断：我们得出的论断是，来自极快实质性子的诱导遗忘CD4+Treg在GITR理解当中得到了扩展和多样化，特别强调了进一步研究成果Treg在1型号乳癌后果性状当中的异质性的全面性。

文中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28