Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身突变到用到1标准型高血压临床征状的成效赴援在学龄前时期就有很好的阐述，多个家兔自身突变无症状的学龄前之中有70%在小鼠匹配后10月内患有高血压，而随访15年的学龄前这一%-上升到84%。相比之下，占临床1标准型高血压一半以上的标准型1标准型高血压的中风机制还没有得到充分的全面性研究。

越来越多的人开始常用分期子系统来定义1标准型高血压的成效：个锥体在用到多种家兔自身突变时带入第1阶段，用到血糖极其时带入第2阶段，用到征状时带入第3阶段。一些多发家兔自身突变无症状的个锥体，在1期和2期，成效较慢，并发展为中风的1标准型高血压。我们以后阐述了一第三组在首次扫描到多种家兔自身突变样本后有数10年无高血压的近于慢成效者，这第三组病患人数少，但构造来得为清楚。随后，我们发现家兔自身蛋白特异性CD8+T亚基质子化在成效平稳的病患之中也就是说不长期存在，但在近期中风和长期长期存在的高血压病患之中很不易扫描到。这可能会指出，与成效病患相比，这些病患免疫性质子化的可调增强。

早期全面性研究指出，尽管可调性T亚基(Treg)数量经常性，但高血压病患长期存在一些功能原因，其之中以外对IL-2的质子化能够降低。此外，高血压病患之中的震荡CD4+T亚基可能会对可调来得具抵抗性，表现为震荡T亚基的减缓减慢，自然转化成的Treg和锥体外转化成的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T亚基之中IL-2质子化减慢。本全面性研究的借此是阐述了CD4+可调性T亚基(Treg)在一小群近于平稳成效者之中的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX全面性研究是一项以人群为基础的交叉全面性研究，在21岁以下确诊的病患亲属之中检查1标准型高血压的危险因素。我们以后阐述了长期平稳成效者的构造，他们保持稳定多重家兔自身突变无症状超过10年，但没有用到高血压的临床征状，慢性或非来进行性免疫性。随后，10名继续保持稳定无高血压并愿意提供大量尿液样本的平稳成效者纳入T和B亚基功能研究。在目前的全面性研究之中，8名慢成效者(SP第三组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔自身突变无症状。所有的组织者都东南面1标准型高血压成效的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身突变对某些蛋白的施打，然而，一名病患已经东南面2期有数6年，但没有用到临床征状，一名病患被临床为高血压，该受试者72岁，在捕获实验室样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据研究之中对该酪氨酸来进行了单独审计。剥离外周血单个核反应亚基(PBMCs)，有别于多参数流式亚基精和T亚基减缓试验审计酪氨酸之中Treg的kHz、表标准型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、连续性和紧接)来进行无监督聚类研究，审计Treg表标准型。

结果：与健康酪氨酸相比，来自慢成效锥体的思绪CD4+T亚基的监督聚类辨识，激已逝的思绪CD4+ TregkHz上升，与持续性诱导的TNFR相关亚基(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升温的病患与成效平稳者和反之亦然的对照第三组相比，Treg可知相同。功能研究指出，与健康酪氨酸相比，来自平稳成效锥体的Treg细胞内的CD4+震荡T亚基减缓明显受损。表现为对震荡CD4+T亚基CD25和CD134表述的减缓上升。

三幅1 全面性的表标准型研究辨识，CD4+Treg亚标准型在慢成效数据流之中上升。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的已逝CD4+CD45RA -亚基上。根据标明物表述鉴别出10个元簇:思绪T亚基_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T亚基;HLA-DR + GITR +思绪T亚基;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个端口推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，来得大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在端口第三组周围上色。每个端口之中的点心三幅透露单个标明的表述分级。(b)每个元聚类的热三幅，以辨识整锥体标明表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)作用于三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的沙质。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster箱1](总质量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T亚基(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T亚基(l)。红色红色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模标准型证实，TregkHz的上升是成效平稳的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘研究(g-k)较为SP组织者和反之亦然的HD组织者在CD4+CD45RA−T亚基上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行剥离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及酪氨酸SP 606(红色)之中CD25+ cd127的kHz汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯邻域的箱1];(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出的簇被标记为SP和HD数据流中间的不同。(j)箱1]辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(%-)。(k)直方三幅辨识每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标明一般来说表述与背景表述(金色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之中标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验

三幅3 与健康献血者相比，成效平稳者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T亚基元簇(思绪T亚基_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T亚基;HLA-DR + GITR +思绪T亚基;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标明的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表述热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述串联，辨识直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon选取记号秩和检验，p< 0.07(红色)所有酪氨酸以外，p< 0.05(金色)酪氨酸SP 606和反之亦然的HD不以外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)串联，辨识直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取记号秩检验

三幅4 来自平稳成效的CD4+ treg亚基控制震荡CD4+T亚基的能够降低。SP第三组用金色的支线和红色透露，HD第三组用粉红色的支线和红色透露，红色的支线/红色透露酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T亚基来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按推论的%-反应物。用抗CD3 /28微珠已逝化亚基，指导3天后来进行流式亚基精扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg指导(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE减缓平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓平均值。常用无症状对照(激已逝的响应亚基不含treg)计算减缓平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

三幅5 震荡CD4+T亚基对平稳成效的T亚基已逝化的减缓来得敏感。SP第三组用金色的支线和红色透露，HD第三组用粉红色的支线和红色透露，红色的支线/红色透露酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T亚基来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按推论的%-反应物。用抗CD3 /28微珠已逝化亚基，指导3天后来进行流式亚基精(CD25反染)和亚基因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者联合指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE减缓百分比(b)。(c,d) CD25减缓百分比(c)和CD134减缓百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自平稳成效子的已逝化思绪CD4+Treg在GITR表述之中得到了扩展和丰沛，强调了大幅度全面性研究Treg在1标准型高血压安全性个锥体之中的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28