Diabetologia：抑制但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身免疫反应会到用到1HG白血病针灸症状的成效不下在老年人时期就有极好的刻画，多个胰脏自身免疫反应会非典HG的老年人中的有70%在血清转换后10年内罹患白血病，而随访15年的老年人这一存量提高到84%。来得之下，%针灸1HG白血病一半以上的HG1HG白血病的患病的系统还没得到前提的研究工作。

更多的人开始用到分前期系统来并不一定1HG白血病的成效：母体在用到多种胰脏自身免疫反应会时进到第1前期，用到血糖异常时进到第2前期，用到症状时进到第3前期。一些多发胰脏自身免疫反应会非典HG的母体，在1期和2期，成效较较慢，并发展为患病的1HG白血病。我们在此之后刻画了一一组在首次侦测到多种胰脏自身免疫反应会样本后至少10年无白血病的变较慢成效者，这一组病人次数少，但特征更为完全一致。随后，我们发现胰脏自身抗体选择性CD8+T细胞内反应会将在成效以致于快的病人中的前提不不存在，但在早先患病和近十年不存在的白血病病人中的很难以侦测到。这有可能表明，与成效病人来得，这些病人自身免疫反应会将的适度增强。

早期研究工作表明，尽管适度性T细胞内(Treg)存量较长时间，但白血病病人不存在一些特性缺陷，其中的除此以外对IL-2的反应会将并能降低。此外，白血病病人中的的振荡将CD4+T细胞内有可能对适度不具抵抗性，表现为振荡将T细胞内的抑止减弱，自然环境产生的Treg和体外产生的抑制Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞内中的IL-2反应会将减弱。本研究工作的意在是刻画了CD4+适度性T细胞内(Treg)在一小群以致于以致于快成效者中的的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究工作是一项以成年人为基础的纵向研究工作，在21岁以下肺炎的病人亲属中的检查1HG白血病的危险因素。我们在此之后刻画了近十年以致于快成效者的特征，他们始终保持多重胰脏自身免疫反应会非典HG超过10年，但没用到白血病的针灸症状，较慢性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名独自始终保持无白血病并愿意提供大量血液样本的以致于快成效者纳入T和B细胞内特性归纳。在在此之前的研究工作中的，8名较慢成效者(SP一组)，中的位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身免疫反应会非典HG。所有的与会者都处于1HG白血病成效的1期，尽管一些人随后得不到了胰脏自身免疫反应会对某些抗体的非典HG反应会将，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但没用到针灸症状，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验者样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该NADPH顺利进行了单独评估。复合外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多表达式流式细胞内法术和T细胞内抑止试验评估NADPH中的Treg的频不下、表HG和特性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无统筹聚类归纳，评估Treg表HG。

结果：与有益NADPH来得，来自较慢成效体的思绪CD4+T细胞内的统筹聚类表明，作用于的思绪CD4+ Treg频不下提高，与免疫抑制抑制的TNFR方面蛋白(GITR)回应提高有关。一名HbA1c下降的病人与成效以致于快者和意味着的对照一组来得，Treg小曲相同。特性归纳表明，与有益NADPH来得，来自以致于快成效体的Treg介导的CD4+振荡将T细胞内抑止明显受损。表现为对振荡将CD4+T细胞内CD25和CD134回应的抑止提高。

绘出有1 深入的表HG归纳表明，CD4+Treg亚HG在较慢成效队列中的提高。由FlowSOM作用于的Treg室，挤满在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物回应鉴定出有10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg记号作用于的10个元簇的MST。每个键值推选一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在键值一组周围手工。每个键值中的的煎饼绘出有回应单个记号的回应级别。(b)每个元聚类的热绘出有，以表明既有记号回应。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)作用于绘出有，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说轻元素为每个metacluster箱内两条路线绘出有(轻元素> 0.05%)确切为HD和SP一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。黄色圆圈推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩验证。此键适用于绘出有形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出有2 用到CITRUS的预测模HG得出有论点，Treg频不下的提高是成效以致于快的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性绘出有。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR回应顺利进行复合，实时FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(布氏)一组以及NADPHSP 606(黄色)中的CD25+ cd127的频不下汇总绘出有。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱内两条路线绘出有;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3回应强度着色，对角突出有的簇被识别系统为SP和HD队列彼此之间的完全相同。(j)箱内两条路线绘出有表明了在SP(布氏)和HD(灰点)一组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说轻元素(存量)。(k)直方绘出有表明每个簇的表HG(粉红色)和Treg记号一般来说回应与文化背景回应(黄色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。文化背景与所有其他簇中的记号的回应有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩验证

绘出有3 与有益献血者来得，成效以致于快者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个回应记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的回应热绘出有(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR回应相联，表明直方绘出有(c)和汇总绘出有(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和验证，p< 0.07(黄色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(黄色)NADPHSP 606和意味着的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR回应，从分级奈斯，从所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)相联，表明直方绘出有(e)和汇总绘出有(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩验证

绘出有4 来自以致于快成效的CD4+ treg细胞内支配振荡将CD4+T细胞内的并能降低。SP一组用黄色的两条路线和圆圈回应，HD一组用黄色的两条路线和圆圈回应，黄色的两条路线/圆圈回应NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被记号为CFSE, Treg按注意到的存量指示剂。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培植3天后顺利进行流式细胞内法术侦测。(a-d)与CD4+应将答者一般来说应将的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。用到非典HG对照(作用于的响应将细胞内另有treg)计数抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出有5 振荡将CD4+T细胞内对以致于快成效的T细胞内再造的抑止更敏感。SP一组用黄色的两条路线和圆圈回应，HD一组用黄色的两条路线和圆圈回应，黄色的两条路线/圆圈回应NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel记号，treg按注意到的存量指示剂。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培植3天后顺利进行流式细胞内法术(CD25反染)和细胞内因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分不下(b)。(c,d) CD25抑止百分不下(c)和CD134抑止百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的回应。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推论的论点是，来自以致于快成效子的再造思绪CD4+Treg在GITR回应中的得到了扩展和多样化，重申了再进一步研究工作Treg在1HG白血病危险性母体中的的表征的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28