Diabetologia：激活但功能损毁的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身抗躯到经常出现1M-乳癌临床疼痛的十分困难率在儿童时期就有很好的叙述，多个肝细胞自身抗躯乙M-肝炎的儿童中所有70%在抗躯转换后10年内患上乳癌，而随访15年的儿童这一分之一上升到84%。相对之下，占临床1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的患病机制还没得到适当的研究工作。

越来越多的人开始用于分期管理系统来并不一定1M-乳癌的十分困难：个躯在经常出现多种肝细胞自身抗躯时重回第1之前，经常出现血糖极度时重回第2之前，经常出现疼痛时重回第3之前。一些多发肝细胞自身抗躯乙M-肝炎的个躯，在1期和2期，十分困难较快，并发展为患病的1M-乳癌。我们之前叙述了一第举例来说在首次探测到多种肝细胞自身抗躯抽样后至少10年无乳癌的正因如此快十分困难者，这第举例来说病症人数少，但相似性非常说明。随后，我们发现肝细胞自身复合物特异性CD8+T中央线粒躯加成将在十分困难快速的病症中所基本不发挥作用，但在近期患病和经常性发挥作用的乳癌病症中所很容易探测到。这可能断定，与十分困难病症相对，这些病症性疾病加成将的通气增强。

早期研究工作断定，尽管通气性T中央线粒躯(Treg)数量正常，但乳癌病症发挥作用一些功能弱点，其中所包括对IL-2的加成将能力下降。此外，乳癌病症中所的物理现象CD4+T中央线粒躯可能对通气更具抵抗性，显出为物理现象T中央线粒躯的选择性减弱，自然产生的Treg和躯外产生的正向Treg，以及复合物经历的CD4+T中央线粒躯中所IL-2加成将减弱。本研究工作的目的是叙述了CD4+通气性T中央线粒躯(Treg)在这群人正因如此快速十分困难者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群结合的纵向研究工作，在21岁以下住院的病症亲属中所检查1M-乳癌的脆弱原因。我们之前叙述了经常性快速十分困难者的相似性，他们保持稳定多重肝细胞自身抗躯乙M-肝炎最多10年，但没经常出现乳癌的临床疼痛，快性或非同步进行性性疾病。随后，10名独自保持稳定无乳癌并愿意备有大量肝脏抽样的快速十分困难者纳入T和B中央线粒躯功能量化。在目前的研究工作中所，8名快十分困难者(SP第举例来说)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身抗躯乙M-肝炎。所有的与会者都处于1M-乳癌十分困难的1期，尽管一些人随后耗尽了肝细胞自身抗躯对某些复合物的乙M-肝炎加成将，然而，一名病症不太可能处于2期至少6年，但没经常出现临床疼痛，一名病症被病患为乳癌，该受试者72岁，在采集实验室抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该丝氨酸同步进行了单独量化。转化外周血单个核中央线粒躯(PBMCs)，采用多常量流式中央线粒躯心法和T中央线粒躯选择性试验量化丝氨酸中所Treg的kHz、基因M-和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和复归)同步进行无监督聚类量化，量化Treg基因M-。

结果：与有益丝氨酸相对，来自快十分困难躯的清醒CD4+T中央线粒躯的监督聚类标示出，正向的清醒CD4+ TregkHz上升，与糖皮质激素正向的TNFR就其蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的病症与十分困难快速者和匹配的相符合第举例来说相对，Treg明人有所不同。功能量化断定，与有益丝氨酸相对，来自快速十分困难躯的Treg介导的CD4+物理现象T中央线粒躯选择性值得注意受损。显出为对物理现象CD4+T中央线粒躯CD25和CD134表述的选择性上升。

左图1 透彻的基因M-量化标示出，CD4+Treg亚M-在快十分困难描述符中所上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -中央线粒躯上。根据上面物表述断定出10个元簇:清醒T中央线粒躯_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T中央线粒躯;HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个链表都是一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在链表第举例来说周围上色。每个链表中所的糕点左图对此单个上面的表述分级。(b)每个元聚类的热左图，以标示出整躯上面表述。(c, d)为HD第举例来说(c)和SP第举例来说(d)生成左图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对较原子量为每个metacluster箱内中央线左图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP第举例来说:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T中央线粒躯(l)。深蓝色左上角都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模M-证实，TregkHz的上升是十分困难快速的标识。分级暂时性(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T中央线粒躯上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的都是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行转化，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(白点)和SP(蓝点)第举例来说以及丝氨酸SP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的kHz概要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的箱内中央线左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述切变上色，交叉突出的簇被辨认为SP和HD描述符中间的不同。(j)箱内中央线左图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)第举例来说中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对较原子量(分之一)。(k)直方左图标示出每个簇的基因M-(粉红色)和Treg上面相对较表述与背景表述(红色);上列，磁盘Treg_3;下面正要，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中所上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与有益献血者相对，十分困难快速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T中央线粒躯元簇(清醒T中央线粒躯_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T中央线粒躯;HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表述热左图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，标示出直方左图(c)和概要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(红色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)串联，标示出直方左图(e)和概要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自快速十分困难的CD4+ treg中央线粒躯控制物理现象CD4+T中央线粒躯的能力下降。SP第举例来说用红色的中央线和左上角对此，HD第举例来说用红色的中央线和左上角对此，深蓝色的中央线/左上角对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒躯同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按仔细观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠正向中央线粒躯，培训3当晚同步进行流式中央线粒躯心法探测。(a-d)与CD4+；也者相对较应将的treg培训(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。用于乙M-肝炎相符合(正向的响应将中央线粒躯内含treg)近似值选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 物理现象CD4+T中央线粒躯对快速十分困难的T中央线粒躯正向的选择性更恰当。SP第举例来说用红色的中央线和左上角对此，HD第举例来说用红色的中央线和左上角对此，深蓝色的中央线/左上角对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒躯同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按仔细观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠正向中央线粒躯，培训3当晚同步进行流式中央线粒躯心法(CD25反染)和中央线粒躯因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606；也者合作培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们断定的假设是，来自快速十分困难子的正向清醒CD4+Treg在GITR表述中所得到了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1M-乳癌危险性个躯中所的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28